免疫细胞的精细化分型一直受到诸多领域众多专家的关注与重视 ，日前《中华预防医学》隆重发布《基于多参数流式细胞术精细化分析外周血免疫细胞亚群的中国专家共识》，再次将免疫细胞精细化分析推向“焦点” ！该共识综合分析了中国中西医结合学会检验医学专业委员会的92位专家所在医疗机构（大多数已使用或者部分使用多参数流式细胞术进行精细化分析外周血免疫细胞亚群）对“基于多参数流式细胞术精细化分析外周血免疫细胞亚群”的反馈意见和纳入的文献。多参数流式细胞术是检测免疫细胞精细化亚群、进行免疫功能评价的重要技术方法，由于增加了更多参数 ，获得更多细胞亚群信息，因此不仅可以在筛查淋巴瘤[1-3]和肿瘤前驱病变（包括癌前病变和癌前状态）[4-5]以及部分遗传和免疫缺陷性疾病诊断[6-8]中发挥一定作用，还可发现很多良恶性疾病的发生 、发展及预后与免疫细胞亚群有关[9-16] ，在免疫治疗[17]和造血干细胞移[18]等特殊治疗后免疫重建中，偏离规律性的精细化免疫细胞亚群变化可能与疾病预后以及并发症有关。为规范外周血免疫细胞亚群的流式细胞术精细化检测方法和方案，进一步促进其在临床疾病诊疗和健康管理中的应用 ，中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织专家制定了此专家共识[19]，该共识包含15条 ，不仅是基于免疫细胞精细化分型的精心之作 ，也是免疫细胞精细化分型广泛应用于临床的重要依据。共识首先指出 ，强烈建议在基础的淋巴细胞亚群检测的基础上增加分化发育、功能性和活化相关标志物 ，根据临床需求选择不同组合的免疫细胞亚群精细化分析 ，如CD25/CD127、CD28等；第二，建议进行多样性 、多表型免疫细胞检测 ，说明精细化分型免疫学标志组合与亚群定义；第三，强烈建议多管8色检测方案，精细化亚群比例分别为占上一层级亚群的比例 。多管8色中 ，包括TBNK绝对计数管、T细胞管、B细胞管、TCR管、Treg/Th管和DC/NK/单核管，基础的TBNK绝对计数需要按照国家指南做好质控 ，其他5管精细化分型可以只报百分比，如果精细化分型报绝对计数，需要根据细胞亚群的特点增加细胞获取数和样本量；第四，强烈建议使用参考区间或者参考范围作为术语 ，建议进行精细化免疫细胞亚群分析获得健康人参考区间[19]。
在传统的简单淋巴细胞亚群检测基础上，增加分化发育、功能性和活化相关标志物 ，根据临床应用需求选择不同组合的免疫细胞亚群精细化分析。根据临床应用需求选择相应的标志物进行不同组合的T细胞相关检测。最低检测要求 ：淋巴细胞占有核细胞比例与绝对数，T细胞（包括总T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞）、B细胞 、NK细胞占淋巴细胞比例和绝对数 ；建议增加标志提供Treg细胞比例、活化和功能性T细胞比例等免疫细胞亚群分析指标。抗原组合及方案见表1和表2。
推荐强度 ：强烈建议。
关于精细化分析 T 细胞亚群的免疫学标志组合与亚群定义，建议采用CD3+CD4+CD25+CD127lo/-检测Treg，CD45RA/CD197将 T 细胞亚群区分为TN、TCM、TEM 、TEMRA，使用 CD38/HLA-DR 区分单阳性或双阳性活化的各亚群 T 细胞，可选择性加入CD183/CD196将Th亚群分为CD183+CD196-、CD183-CD196- 、CD183-CD196+三个亚群等。
推荐强度 ：强烈建议 。
根据临床应用需求选择B细胞亚群相关检测标志。建议精细化分析免疫细胞亚群纳入CD27、CD24、CD38 ，酌情纳入kappa 、lambda 、CD5 。建议的检测抗原及方案见表1和表2。基础免疫细胞功能分析极少关注NK细胞、单核细胞、DC的亚群区分 。精细化分析免疫细胞亚群可以逐次增加标志组合，根据CD16与CD56的表达区分NK细胞亚群，系别阴性（CD3-CD19-CD56-）细胞群分别使用HLA-DR+CD14+/lo和HLA-DR+CD14-识别单核细胞和DC细胞群（需要注意的是存在天然免疫抑制/低下的患者，单核细胞以及DC的HLA-DR的表达可降低），进一步使用CD16和CD14对单核细胞进行分群，CD123和CD11c对DC进行分群。
目前MDSC的研究主要用于某些良恶性疾病相关的特殊免疫细胞亚群研究，在一般的基础和精细化分析免疫细胞亚群中均不主张纳入，其他免疫细胞群也主要用于疾病治疗相关的特殊免疫细胞检测，方案也随着研究和应用需求而有所不同 。特殊疾病和健康管理相关的特殊免疫细胞亚群 ，根据疾病特点以及检测目的选择相应组合进行筛查。因为绝对计数和精细化亚群分析存在操作的差异性，所以建议分管进行。绝对计数管仅做基础的总T细胞 、CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、NK细胞的比例和绝对计数，可以采用单平台和双平台方法 ，操作与分析的技术要点和质量控制见国家指南。精细化分析免疫细胞亚群建议由8色MFC管完成，其精细化程度与方案根据临床应用需求选择。可以采用多管8色及以上方案或一管超多色方法，精细化亚群比例分别为占上一层级亚群的比例。共识建议的8色多管组合方案见表2 ，使用其他 MFC检测技术平台时可参照该方案调整确定。数据分析时使用Diva、flowjo 、kaluza及其他类似功能的软件均可。建议分析的T细胞 、B细胞、NK细胞、DC、单核细胞、粒细胞以及各亚群的免疫表型定义以及方案见表1和表2。免疫细胞亚群检测结果判定参照物的术语，建议使用参考区间或者参考范围而非正常值。为了达到通过免疫功能检测前瞻性预警与筛查的目的 ，建议进行精细化免疫细胞亚群分析获得popRI ；以popRI作为参照，相关指南共识为依据 ，对个体的检测结果进行解读，给临床诊疗和健康管理提供辅助诊断信息或者进一步检测的建议 。疾病发展和治疗有规律性过程 ，为了预警疾病进展、发现并发症，建议建立合理的治疗和疾病恢复期监测时间点和无并发症患者中反映免疫细胞恢复的RCV。建议将部分认识较成熟的免疫衰老（如CD57等） 、免疫耗竭（如PD1等）相关指标纳入精细化免疫细胞亚群 ；将popRI进行年龄段的细分，甚至做逐年变化曲线，并定期修订 。健康管理的地位日益重要 ，免疫功能检测应该赋予一定的早期筛查淋巴瘤和肿瘤前驱病变的作用，以及为一些淋巴细胞克隆性指标建立popRI ，建议逐步将kappa/lambda和TRBC1 、TCRVδ1和/或TCRVδ2纳入精细化免疫细胞亚群检测。
从该版中国专家共识可以看出，“精细化分析”及“多参数”十分关键，传统的免疫细胞检测和功能评估过于简单，局限于检测T、B 、NK细胞的比例及绝对数 ，反映免疫细胞的信息不够全面、立体 ，精细化分析外周血免疫细胞亚群增加了调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）、树突状细胞（dendritic cells，DC）等各类免疫细胞，以及检测其分化发育 、功能性和活化状态相关标志物 ，更加精准地描述免疫细胞所处的阶段和相关的细胞功能，为临床提供更多可选择信息。
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